Estancia científica en Japón (4): extracción del esperma de fugu

Cuando capturamos los peces globo que vienen a reproducirse en la playa estamos seguros de que se trata de machos y de hembras maduros sexualmente. Eso supone que los machos sean fluyentes, es decir, que tienen esperma maduro que podemos utilizar en nuestros experimentos.

En el caso de esta especie, generalmente muy tranquila, no se precisa el uso de anestesia, y tratamos de realizar el proceso de forma rápida. Eso sí, si se estresan, se pueden hinchar (como en la primera foto) y entonces hay que esperar a que se deshinchen. Como en otras especies de peces marinos, la extracción del esperma debe comenzar con un lavado de la zona abdominal con abundante agua destilada para tratar de evitar la absorción con la muestra de agua marina, heces u orina, que podrían activar la movilidad del esperma, que está inmóvil en el interior del espermiducto.

A continuación, se seca bien la zona con papel absorbente y se realiza un pequeño masaje abdominal (stripping) en dirección céfalo-caudal (de cabeza a cola), para hacer salir el esperma. Se debe de tratar no absorber orina o heces, en especial si los peces se han capturado el mismo día o pocos días después y tienen todavía restos en el intestino.

En este caso estamos utilizando una pipeta automática de 5 ml para hacer la succión y eppendorfs para mantener las muestras, normalmente a 4 ºC.

Las muestras frescas no aguantan especialmente bien si no se diluyen. Por eso lo estamos diluyendo 1:50 en medio SLS (seminal plasma-like solution) descrito por Krasznai et al. (2003), aunque nos planteamos tratar de mejorarlo para conseguir una supervivencia a más largo plazo.

Estancia científica en Japón (3): la puesta de los fugus

Según nos cuenta, esta especie de pez globo (pufferfish en inglés, fugu en japonés y Takifugu niphobles en latín) se reproduce en unos pocos puntos de la costa de Japón. Y da la casualidad de que uno de ellos es un rincón de la playa que tenemos bajo la Misaki Marine Biological Station. Esto hace que sea una de las especies que los investigadores de este centro utilizan para sus estudios de reproducción. Nosotros nos aprovecharemos también durante nuestras semanas de estancia. De hecho, ayer mismo cogimos 5 machos con cuyo esperma trabajaremos la próxima semana.

Pero la freza de estos animales tiene dos aspectos que la hacen muy especial. Los peces se concentran cerca de la orilla uno o dos días después de la luna llena o la luna nueva y coincidiendo con el momento de marea más alta del día (en la foto de arriba podéis verlos saliendo del agua con las olas). Los machos esperan la llegada de las hembras (al parecer la proporción es de 20 machos por hembra) y ellas aprovechan las olas para salir del agua y quedar momentáneamente fuera del agua, donde son seguidas por unos cuantos machos y, a la vez que ellas ponen los huevos ellos liberan el esperma. En los momentos de mayor actividad hemos podido ver a cerca de 100 peces sobre la arena o esperando para salir con las próximas olas.

 

A veces les cuesta un poco volver al agua, pero como tienen el abdomen aplanado se suelen quedar erguidos y con un poco de paciencia y algún salto-aleteo consiguen volver al agua. Aunque he de reconocer que el otro día no puede resistirme y devolví al agua a 8 o 10 peces que parecía que iban a conseguir volver por sí mismos. Además, los milanos (aquí apenas hay gaviotas, pero sí muchos de éstos) están pendientes a ver si pueden pillar a alguno.

Un pequeño gran espectáculo de la naturaleza al que hemos tenido la suerte de poder asistir.

Estancia científica en Japón (2): primeras tareas de laboratorio

Hoy hace 12 días de nuestra llegada a la Misaki Marine Biological Station (MMBS). Desde el primer momento y aún a medio superar el jet-lag nos pusimos a trabajar tanto en el laboratorio como en la redacción de artículos, proyectos y un capítulo de libro que tengo entre manos. Y como estamos en plena época de lluvias, estamos echándole muchas horas.

Al llegar, preparamos la poyata del laboratorio y la zona del microscopio donde vamos a trabajar. Nos mostraron la sala de acuarios donde tenemos nuestros peces e incluso nos encontramos ya con un par de peces globo cogidos en la playa unos días antes por nuestros colegas (muchas gracias!). De esos machos extrajimos esperma, que nos sirvió para ensayar el efecto de algunos diluyentes y poner a punto el software asociado al microscopio para la captura de vídeos y la posterior evaluación de la calidad espermática (CASA-Mot).

 

Esta misma semana hemos coincidido en la MMBS con un grupo de alumnos de la Shizuoka University, encabezados por el Profesor Toshinobu Tokumoto. El grupo ha pasado unos días haciendo prácticas en estas instalaciones y muestreando con las embarcaciones del centro. Una de las noches los estudiantes realizaron una pesca nocturna utilizando luces para atraer a los peces, y fueron tan amables de guardar los peces globo que cogieron para nosotros (muchas gracias!). De 5 de esos peces pudimos obtener muestras de esperma con las que hemos podido realizar algunos experimentos previos de criopreservación y del efecto de los iones en la activación de la movilidad espermática, que serán el principal objetivo de nuestra estancia.