viernes, 20 de julio de 2018

Estancia científica en Japón (y 8): Acabando cosas…


Los últimos días en Japón han sido intensos. Hemos intentado finalizar varios experimentos, hemos expuesto los resultados preliminares en una reunión con el equipo del Dr. Manabu Yoshida. Y la simpática estudiante de biología con la que hemos coincidido parte del tiempo, la francesa Sumangala (“Sumi”) Thiyakeswaran, se está encargando de hacer las últimas evaluaciones de muestras de varios experimentos, ahora que ya estamos de vuelta en España. Mil gracias Sumi!
A Luz y a mí nos ha dado tiempo a una visita turística rápida a Yokohama, mientras Víctor pasaba un par de días en Tokyo. Y por muchas cosas que veas aquí, siempre tienes la sensación de que no acabas ni de empezar!.

Ahora ya reincorporados a la UPV, iremos trabajando en los resultados de los diferentes experimentos realizados y tratando de componer un par de artículos con ellos. Manabu y Kaoru, muchas gracias por la experiencia y todas las facilidades!!

Estancia científica en Japón (7): Efecto de la criopreservación del esperma de fugu en la fertilización


Los experimentos de fertilización in vitro han permitido comprobar que el esperma criopreservado del pez globo conserva su capacidad de fertilización, y se han podido obtener las primeras “criolarvas” de esta especie. Por otra parte, dado que el proceso de criopreservación afecta negativamente a los parámetros cinéticos (movilidad y velocidad) del esperma, el ratio huevo:esperma necesario para alcanzar tasas elevadas de fertilización y eclosión es más alto cuando se usa esperma criopreservado que cuando se utiliza esperma fresco, por lo que es necesario ajustar estos parámetros a la hora de llevar a cabo ensayos de fertilización in vitro.


Para ello, capturamos una hembra madura y varios machos en la playa de Arai, junto a la MMBS. De los machos extrajimos el esperma y evaluamos su calidad mediante un sistema CASA-Mot para elegir las 3 mejores muestras. 

Ese esperma se utilizó en fresco, o bien se congeló y descongeló, para hacer la fertilización de los huevos de las hembras. Y el esperma, fresco o descongelado, se utilizó en diferentes concentraciones con respecto al número de huevos.

Después de 8 días, en los que se renueva periódicamente el agua de las placas Petri donde se incuban los huevos fertilizados, empieza la eclosión de los huevos y las larvas, que ya presentan unos grandes ojos y cierta pigmentación. 

A lo largo del proceso hemos ido haciendo fotografías que nos permitirán determinar las tasas de fertilización, desarrollo embrionario y eclosión obtenidas con cada esperma, con el objetivo de determinar el efecto de la criopreservación en el desarrollo embrionario de esta especie.

Estancia científica en Japón (6): Criopreservación del esperma de fugu


Entre los trabajos llevados a cabo durante nuestra estancia en la MMBS, hemos trabajado en el desarrollo de un protocolo de criopreservación para el esperma de pez globo (Takifugu niphobles), que podría utilizarse en un futuro banco de germoplasma de la especie.


Durante este experimento se han analizado diferentes factores como i) el ratio esperma:diluyente:crioprotector y ii) la congelación de gametos en diferentes volúmenes (pajuelas de 0.5 ml y criotubos de 2 y 5 ml), evaluando sus efectos sobre los parámetros cinéticos del esperma. 
En general, todos los viales han generado excelentes resultados post-congelación (60 y 50% de células móviles para pajuelas y criotubos, respectivamente), que han permitido realizar nuevos experimentos sobre la capacidad de fertilización del esperma criopreservado.