viernes, 15 de agosto de 2014

Sesión AQUAGAMETE en el AE2014



Entre las actividades del congreso Aquaculture Europe 14, organizado por AZTI-Tecnalia y la European Aquaculture Society (del 14 al 17 de octubre de 2014 en el Kursaal de Donostia-San Sebastián), tendrá lugar una doble sesión organizada por la Acción COST AQUAGAMETE.

La sesión estará dedicada a la biología de los gametos de especies acuáticas, se desarrollará entre el 15 y el 16 de octubre, y está previsto un total de 25 comunicaciones orales y 20 posters.


miércoles, 13 de agosto de 2014

Asisto a las V Jornadas de la Sociedad Ibérica de Ictiología

La Sociedad Ibérica de Ictiología (SIBIC; http://www.sibic.org/presentacion.html) ha celebrado las V Jornadas Ibéricas de Ictiología en el Museo de Ciencias de la Universidad de Lisboa (Portugal) entre el 24 y el 27 de junio 2014, con más de 200 participantes de unos 20 países y que presentaron 190 trabajos en sesiones paralelas de comunicaciones orales y sesiones de posters.

Desde nuestro grupo de investigación hemos querido participar en estas Jornadas con dos comunicaciones orales:

●Cryopreserving European eel (A. anguilla) sperm: comparison of two methods for standardization
M.C. Vílchez, M. Morini, D.S. Peñaranda, L. Pérez, A. Depincé, E. Kása, C. Labbé, Á. Horváth, J.F. Asturiano

●AQUAGAMETE COST Action. Resume of the first grant period (March 2013 – May 2014)
M.J. Bayarri, Á. Horváth, J.F. Asturiano

además de un poster que muestra parte de los resultados obtenidos por Víctor Gallego durante su estancia en Japón:

●Embryogenic staging of pufferfish (Takifugu niphobles) under two thermal regimes: climate change implications
V. Gallego, G. Fraser, M. Yoshida, J.F. Asturiano

Tenéis acceso al contenido del Libro resúmenes de las Jornadas a través del link: http://sibic.org/jornadas/2014/comunicaciones_es.html


La temática que cubren estas Jornadas es distinta a la de otros congresos a los que asistimos periódicamente, pero resulta muy interesante ver otros tipos de estudios realizados con peces, y las ideas para posibles colaboraciones surgen rápidamente.
El colectivo de investigadores que congrega la SIBIC es muy joven y el ambiente ha sido muy bueno. Además, ha sido una gran oportunidad para descubrir algunos rincones de Lisboa.

En paralelo a las Jornadas, el Museo ha acogido una exposición sobre ilustración científica de peces, explicando los pasos del proceso y mostrando una colección de ilustraciones acabadas y absolutamente magníficas.

Coincidiendo con almuerzos y descansos hemos tenido acceso a los equipos expuestos por algunos patrocinadores en una de las salas del Museo.
Las Jornadas acabaron con una visita al Oceanario de Lisboa, una instalación fantástica que no conocía. Enhorabuena por todo a los organizadores. Gracias!.

Además de haberme invitado a formar parte del Comité Científico de estas Jornadas, los colegas de la SIBIC han considerado que podía tener un papel en la nueva Junta Directiva de la Sociedad, que se renovó tras la correspondiente votación el último día de las Jornadas de Lisboa. En concreto, la idea surge de la ampliación de los objetivos científicos de la Sociedad que ha pasado de centrarse en el estudio de especies de peces dulceacuícolas, a incorporar también a las especies de peces marinos. Así pues, desde hace unas semanas tengo el placer (y la responsabilidad) de ser uno de los vocales de la Junta Directiva de la SIBIC (dirigida por Filipe Ribeiro) y, en especial, junto a nuestro colega Filipe Martinho, tengo el encargo de trabajar en la incorporación de grupos de investigación e investigadores dedicados al estudio de peces marinos. Si es vuestro caso, estoy a vuestra disposición.

Las fotos que ilustran esta entrada han sido proporcionadas por Joao Carrola.

martes, 29 de julio de 2014

Estancia de David S. Peñaranda en París


Durante el mes de julio, nuestro compañero David S. Peñaranda ha realizado una estancia en el Laboratory BOREA del Muséum National d’Histoire Naturelle (MNHN) de París, dirigido por nuestra colega y amiga la Dra. Sylvie Dufour (en la foto con David).

Los principales objetivos de la estancia han sido:

1) La puesta a punto de un protocolo para el cultivo in vitro de testículo de anguila europea, que se ha basado en protocolos previamente descritos para otras especies.

2) Evaluar in vitro el efecto de diferentes dosis de esteroides y sus efectos sinérgicos/antagónicos en el transcriptoma de la hipófisis de esta especie y, en especial, sobre los receptores del factor liberados de las gonadotropinas (GnRH-R).

Tanto el MNHN como la UPV han participado en el Proyecto europeo PRO-EEL y seguirán esta colaboración en el marco del proyecto REPRO-TEMP (“La anguila europea como modelo para estudiar la temperatura como modulador de la maduración sexual en teleosteos. Potencial aplicación en acuicultura”) financiado por el Ministerio Español de Economía y Competitividad (MINECO).


La estancia ha sido financiada mediante una Short Term Scientific Mission de la Acción COST AQUAGAMETE.

jueves, 24 de julio de 2014

La Acción COST AQUAGAMETE financiará 17 nuevas estancias

Como resultado de su cuarta convocatoria de estancias cortas (Short Term Scientific Missions), la Acción COST AQUAGAMETE financiará parte de 17 nuevas estancias durante los próximos meses.

Los investigadores implicados viajarán de España a Francia (1); República Checa a Francia (2); República Checa a Italia (1); Hungría a España (1); España a Portugal (4); Portugal a España (1); Portugal a Francia (2); España a Noruega (1); España a Israel (1); España a Brasil (1); Italia a Noruega (1); y Eslovenia a Portugal (1).

La quinta convocatoria de STSM está prevista para el mes de octubre de 2014.

lunes, 21 de julio de 2014

Nuestro último artículo, aceptado en Aquaculture

Temperature modulates the progression of vitellogenesis in European eel

I. Mazzeo, D.S. Peñaranda, V. Gallego, S. Baloche, R. Nourizadeh-Lillabadi, H. Tveiten, S. Dufour, J.F. Asturiano, F.-A. Weltzien, L. Pérez

Wild female European eels were matured with CPE (carp pituitary extract) under three thermal regimes, two of which were variable (T10-15 and T15-18, moving from 10 to 15 ºC and from 15 to 18 ºC, respectively) and one constant, at 18 ºC (T18). Before and during hormonal treatment, the eels were sampled and biometric measurements were taken. Immunoassays of sex steroids and vitellogenin were performed, as well as qPCR analyses of gene expression (ovarian cyp19a1) and ovarian histology. Prior to the hormonal treatment, the silver eels which had been maintained at 18 ºC showed lower 11-KT and E2 plasma levels compared to those maintained at 10 ºC. In addition, in the early vitellogenic stage, the androgen and cyp19a1 levels were lower at 18 ºC than at 10 ºC. Both these results and the positive correlations found between GSI and 11-KT (at the PV stage) and between oocyte diameter and cyp19a1 levels (in the EV stage), suggest that early ovarian development is facilitated at low temperatures.

Vitellogenesis was induced by CPE in all the thermal groups, but progression to the mid-vitellogenic stage was only observed after an accumulation of 900-1200 ºD, at 15 or 18ºC, and progression to the late vitellogenic stage was only observed after an accumulation higher than 1300 ºD, at 18 ºC. Although temperature increased the rate of CPE-induced ovarian development, our results clearly indicate that this increase is not linear, but exponential, with acceleration in the increase of GSI at 18 ºC from the mid-vitellogenic stage, or after an accumulation of 1300 ºD. For the first time, a down-regulation of ovarian cyp19a1 caused by high temperatures in CPE-treated eels was observed. These results demonstrate that temperature can modulate eel ovarian development both before and after exogenous hormonal stimulation, and this knowledge could be used to manipulate the timing of vitellogenesis progression under laboratory conditions.

domingo, 6 de julio de 2014

Congelando esperma de pez cebra, III: ¿qué resultados se han obtenido?


Hace unos días procedimos a descongelar las muestras de esperma de pez cebra que habíamos ido congelando las últimas semanas. Sacamos las muestras de los depósitos de nitrógeno y las fuimos descongelando en un baño caliente para inmediatamente evaluar el porcentaje de espermatozoides capaces de moverse tras activar con agua, así como el porcentaje de células viables, utilizando una tinción fluorescente.
Empezamos a tener claro qué crioprotector es el que proporciona mejores resultados, pero serán necesarios nuevos experimentos aumentando el número de muestras y usando diferentes concentraciones del crioprotector, rampas de congelación y otras variables. 


viernes, 4 de julio de 2014

Congelando esperma de pez cebra, II: ¿cómo?

Pues, entre otras cosas, en eso estamos durante nuestra estancia en Portugal. Hemos tratado de congelar esperma de pez cebra mediante masaje abdominal y congelarlo inmediatamente, usando diferentes crioprotectores como parte del medio de congelación.
La selección de los ejemplares y el control de la anestesia ha sido cosa de Gil (en la foto), el técnico del Grupo de EDGE (Grupo de Biología Molecular de Organismos Marinhos) encargado del mantenimiento de los cebra.

Una vez anestesiados los peces, extrayendo el esperma hemos estado Paulo Gavaia y yo mismo. Como veis en las fotos, Paulo hacía el masaje abdominal utilizando una pinza ancha (y mucho mimo) mientras yo trataba de obtener la muestra de esperma. La cosa no es fácil porque lo normal ha sido obtener entre 1 y 3 microlitros de los macho fluyentes. Para ello, nos hemos planteado el uso de varias herramientas (micropipetas, jeringas y similares), pero de momento la mejor opción nos ha parecido usar estos capilares conectados a un tubo de succión. Una herramienta de 1977!!, como veis en la tapa.
Marta F. Riesco ha estado diluyendo las muestras en los distintos medios de congelación y congelándolas en hielo seco antes de transferirlas a los depósitos de nitrógeno líquido para su almacenamiento.
Y finalmente Elsa Cabrita y Luz Pérez han utilizado el volumen restante de las muestras para evaluar su movilidad antes de la congelación utilizando un software CASA.

Curso de análisis de calidad de anguila

Announcement

ICES Workshop of a Planning Group on the Monitoring of Eel Quality: “Development of standardized and harmonized protocols for the estimation of eel quality.” (WKPGMEQ)
At INBO, Brussels, Belgium, 20-22 January 2015

The European eel (Anguilla anguilla) stock has been declining for several decades. Pollution by bioaccumulating toxic compounds and the impact of (new) disease agents have been suggested as possible causes for this decline. The ICES WGEEL 2012 stated, that, to improve the assessment of the impact of contaminants and diseases on effective spawner biomass and reproductive success of the European eel, national routine monitoring programmes are urgently required. The WGEEL 2012 and OSPAR recommended Member States to implement routine monitoring of eels for lipid levels, contamination and diseases. They also identified the need to develop standardized and harmonized protocols for the estimation of eel quality. This would create the possibility, to compare national data and to reliably incorporate them into international stock assessments. Measuring contaminant levels in eel relates to the Eel Regulation (Council Regulation No 1100/2007), to the 2013 EC Directive dealing with Priority Substances under the Water Framework Directive (2013/39/EC and 2008/105/EC) and to the Commission Regulation No 1881/2006 setting levels for a number of contaminants in foodstuffs to protect public health, a.o.

The Workshop aims to design standardized and harmonized monitoring protocols, and to facilitate the integration of eel quality parameters in quantitative assessment of the reproductive potential of the stock.

Objectives:
a )   design standardized and harmonized protocols for the estimation of eel quality with regard to the bioaccumulation of contaminants (including sampling, analysis and reporting).
b )   design standardized and harmonized protocols for the estimation of eel quality with regard to diseases (including sampling, analysis and reporting).

A report will be prepared and finalized by 28 February 2015 for the attention of ICES.

Experts involved in the monitoring, analysis or reporting of contaminants in and/or diseases of the eel are invited to sign up for participation to this workshop by sending an email on their application before 1st of October, 2014 to Claude Belpaire Claude.Belpaire@inbo.be and Olga Haenen Olga.Haenen@wur.nl

sábado, 21 de junio de 2014

Congelando esperma de pez cebra, I: ¿por qué?


Además de las ventajas de trabajar con una especie del tamaño y forma de vida propia de los peces cebra (Danio rerio), las miles de líneas mutantes y transgénicas del pez cebra son una herramienta fundamental en muchas áreas de investigación (fisiología, biomedicina, toxicología, biología del desarrollo, etc.) que utilizan estos peces especiales como modelo para experimentación animal.

Sin embargo, algunas de estas líneas tienen problemas reproductivos que limitan el número de ejemplares disponibles. Y, por otro lado, convendría poder conservar el material genético propio de estos ejemplares en previsión de patologías o accidentes que pudiesen suponer la muerte de todo el lote de peces.

Así pues, en los últimos años se han ido haciendo intentos para congelar el esperma de esta especie, pero dado el escaso volumen de esperma que puede obtenerse de cada macho, a menudo se han basado en el sacrificio de los ejemplares para extraer sus testículos y obtener así un mayor volumen de esperma.

Pues, entre otras cosas, en eso estamos durante nuestra estancia en Portugal. Hemos tratado de obtener esperma de pez cebra mediante masaje abdominal y congelarlo inmediatamente, usando diferentes crioprotectores como parte del medio de congelación.

miércoles, 18 de junio de 2014

Congelando testículo de corvinas

Hace unos días pude echar una mano a Marta F. Riesco y Elsa Cabrita en una de sus sesiones de trabajo en el Centro de Acuicultura del IPMA (Instituto Portugués del Mar y de la Atmósfera) en Olhao.
 

El objetivo era congelar fragmentos de testículo (como los de la foto) de corvina (Argyrosomus regius) de determinada edad, cuando tienen un mayor porcentaje de espermatogonias, para luego poder aislarlas disgregando el tejido testicular una vez descongelado.


En este caso utilizamos un biocongelador portátil que permite establecer rampas de congelación (como muestra la foto), bajando la temperatura de las muestras al ritmo que se programe. Y un vez congeladas se pasan a nitrógeno líquido para su almacenamiento. Eso sí, ocupa un montón de espacio. Ya veis cómo iba el coche!.

miércoles, 4 de junio de 2014

AQUAGAMETE - 2nd Core Group meeting

La tarde del pasado domingo 25, y aprovechando la asistencia de varios colegas para participar en el 10th ISRPF, tuvimos la segunda reunión del Core Group de la Acción COST AQUAGAMETE en las instalaciones del CCMAR en el Campus de Gambelas (Faro). Asistieron Ákos Horváth (Hungría), Elsa Cabrita (Portugal), Oliana Carnevali (Italia), Andrzej Ciereszko (Polonia) y yo mismo (España).

Durante la reunión se informó a los asistentes del estado de cuentas de la Acción, del presupuesto y del plan definitivo de las actividades previstas para el segundo periodo (junio 2014 – mayo 2015), de las conclusiones tras el último Annual Progress Conference de COST en Bulgaria, y se discutió de distintos aspectos relacionados con la marcha de AQUAGAMETE. Los responsables de los distintos Working Groups hicieron un informe de sus respectivas actividades y planes de trabajo, en especial en lo referente a las publicaciones previstas, la organización de las próximas Training Schools y de la quinta edición del International Workshop on the Biology of Fish Gametes en Ancona (Italia).

martes, 3 de junio de 2014

Buscando las células madre precursoras de espermatogonias


Marta F. Riesco y Elsa Cabrita han llevado a cabo estos días varias sesiones de trabajo en el Centro de Acuicultura (IPMAR). En ellas han ido recopilando muestras de testículo de corvinas de diferentes edades y, por lo tanto, en diferentes estadíos de desarrollo. 


Pretenden determinar en cuál de ellos es posible encontrar las células madre precursoras de espermatogonias. La evaluación histológica de las muestras permitirá obtener las primeras conclusiones.
Estos estudios completarán la caracterización y secuenciación del marcador molecular vasa, así como la expresión de dicho marcador a lo largo del desarrollo gonadal en esta especie. Estos estudios representan un avance en la problemática reproductiva relacionada con esta especie en la que todavía no ha sido descrito ningún marcador de la línea germinal. Servirán como herramienta de caracterización y de seguimiento de dichas espermatogonias (que junto con las PGCs son los únicos tipos celulares con capacidad de migración a la la cresta germinal si se microinyectan en una larva portadora) en potenciales xenotrasplantes para la producción subrogada de gametos de esta especie (cuyos reproductores son muy grandes, lo que supone varios problemas de mantenimiento en cautividad) en otras especies similares y con reproductores de menor tamaño.

lunes, 2 de junio de 2014

Un poco de histología


Mientras que yo les dedico ratos a los peces cebra, a Luz y Marta les ha tocado hace unos días algo de técnicas clásicas de histología: hacer bloques de parafina, cortarlos con microtomo y teñirlos.

En el caso de Luz se trata de unas muestras que trajimos fijadas desde Valencia, en concreto tras un muestreo de unas hembras de anguila en el Centro de Cultivo de Peces de Aguas Templadas de Polinyà del Xúquer (Generalitat Valenciana). Las observaciones histológicas complementarán los análisis de expresión génica de distintos ARNs ribosómicos que de esos mismos animales está haciendo el equipo de nuestro colega Ibón Cancio, de la Universidad del País Vasco. Los resultados se presentarán en la sesión especial de AQUAGAMETE en el AE2014 el próximo octubre.

En el caso de Marta, se trata de localizar las espermatogonias de la corvina. Os lo cuento mejor en otra entrada porque el tema lo merece.

miércoles, 28 de mayo de 2014

Nuevo muestreo de lenguados

La semana pasada volvimos a las instalaciones de acuicultura experimental de Ramalhete del CCMAR en la Ria Formosa, de cuyas instalaciones os pongo algunas imágenes.



Como la semana anterior habíamos determinado el sexo de los ejemplares de varios lotes de lenguados reproductores, en esta ocasión hemos localizado rápidamente a 5 de los machos mediante los chips que llevan instalados (y gracias al buen ojo de Elsa).


Una vez anestesiados, de cuatro de ellos pudimos obtener esperma masajeando el testículo y absorbiendo la muestra con una jeringa desde el poro genital (escondido por una de las aletas en el costado del pez), y procurando que no se contamine con la orina del animal.

Ya veis en la foto el escaso volumen que producen, así que procedimos a diluirlo con varios medios diluyentes que estamos ensayando como parte de los trabajos que estamos realizando aquí.

Tras desplazarnos rápidamente al Campus de Gambelas procedimos al análisis de las muestras recogidas utilizando el ISAS, un sistema CASA (computer-assisted sperm analysis) de la empresa valenciana Proiser.

Una primera medida de diferentes parámetros de movilidad de los espermatozoides mantenidos en los diferentes diluyentes tras ser diluidos en agua de mar, seguida de otra medida a las 24 h, nos permitirá ir concluyendo qué tipo de diluyentes funcionan mejor con el esperma de esta especie. En las próximas semanas iremos aumentando el número de observaciones para que nuestros resultados sean lo suficientemente sólidos.

martes, 27 de mayo de 2014

Asistimos al 10th ISRPF

Esta semana se está celebrando en el Auditorio Municipal de Olhão la décima edición del International Symposium on the Reproductive Physiology of Fish, congreso que se celebra cada cuatro años (aunque en este caso se celebra tan sólo tres después del último para evitar que en el futuro coincida con el congreso bienal Fish Endocrinology, al que suelen asistir muchos de los participantes en éste).
Hemos podido asistir Luz Pérez, David S. Peñaranda, Marina Morini, Mamen Vílchez y yo mismo. Nuestro grupo ha hecho un esfuerzo importante por participar con varios trabajos en un congreso de este nivel, y buena parte de ellos se han llevado a cabo en colaboración con equipos extranjeros. Así, como orales, presentaremos estos tres trabajos:

●Temperature as modulator of the steroidogenic process in European eel: migratory implications
D.S. Peñaranda, M. Morini, M.C. Vílchez, V. Gallego, I. Mazzeo, R.P. Dirks, G.E.E.J.M. van den Thillart, H. Tveiten, L. Pérez, J.F. Asturiano

●The ion puzzle which makes the eel sperm motile
L. Pérez, V. Gallego, M.C. Vílchez, M. Morini, R. Baeza, D.S. Peñaranda, J.F. Asturiano

●DNA methylation of fish germ cells and the risk of alteration after cryopreservation
C. Labbé, A. Depincé, P. Milon, M. Morini, M. Riesco, V. Robles, J.F. Asturiano, Á. Horváth, M.P. Herráez

Mientras que en las sesiones de posters mostraremos otros cuatro trabajos:

●Water temperature effect on fatty acid mobilization in male European eels during sexual maturation and relationship between fatty acids, steroids and sperm quality parameters
R. Baeza, I. Mazzeo, M.C. Vílchez, V. Gallego, D.S. Peñaranda, L. Pérez, J.F. Asturiano

●Progestin receptors expression in European eel testis through spermatogenesis
M. Morini, D.S. Peñaranda, M.C. Vílchez, V. Gallego, R. Nourizadeh-Lillabadi, J.F. Asturiano, F.-A. Weltzien, L. Pérez

●Sperm protein for egg activation: PLCZ1 expression in European eel testis through spermatogenesis
M. Morini, D.S. Peñaranda, M.C. Vílchez, V. Gallego, R. Nourizadeh-Lillabadi, J.F. Asturiano, F.-A. Weltzien, L. Pérez

●Effect of thermal regime on vitellogenesis, ovulation and larval development of European eel
M.C. Vílchez, L. Pérez, I. Mazzeo, D.S. Peñaranda, V. Gallego, S. Dufour, F.-A. Weltzien, J.F. Asturiano


Disponible el programa de las V Jornadas de Ictiología

Ya está disponible el programa de la próximas jornadas!

Puedes descargarlo en 
http://sibic.org/jornadas/2014/



lunes, 19 de mayo de 2014

Trabajos con pez cebra

Ya desde la primera semana de esta estancia he podido empezar a trabajar con los técnicos del Grupo de EDGE (Gil, Francisco y el gallego Paulo) encargados de los trabajos con pez cebra (Danio rerio), que pacientemente responden a mis preguntas a la vez que me ayudan con mi portugués.

El Grupo dispone de dos instalaciones dedicadas a esta especie y en las que mantienen líneas de ejemplares con distintas mutaciones interesantes para sus numerosos estudios, especialmente sobre fisiología de tejido óseo.

Uno de mis objetivos de esta estancia es aprender el manejo básico de esta especie y este tipo de instalaciones en un centro de referencia como este. Por el momento he ayudado con las labores de limpieza, las de alimentación (con pienso, Artemia y Artemia enriquecida), con la rutina de los cruces diarios entre reproductores y con el cuidado larvario. Muy interesante y muy laborioso.