sábado, 21 de junio de 2014

Congelando esperma de pez cebra, I: ¿por qué?


Además de las ventajas de trabajar con una especie del tamaño y forma de vida propia de los peces cebra (Danio rerio), las miles de líneas mutantes y transgénicas del pez cebra son una herramienta fundamental en muchas áreas de investigación (fisiología, biomedicina, toxicología, biología del desarrollo, etc.) que utilizan estos peces especiales como modelo para experimentación animal.

Sin embargo, algunas de estas líneas tienen problemas reproductivos que limitan el número de ejemplares disponibles. Y, por otro lado, convendría poder conservar el material genético propio de estos ejemplares en previsión de patologías o accidentes que pudiesen suponer la muerte de todo el lote de peces.

Así pues, en los últimos años se han ido haciendo intentos para congelar el esperma de esta especie, pero dado el escaso volumen de esperma que puede obtenerse de cada macho, a menudo se han basado en el sacrificio de los ejemplares para extraer sus testículos y obtener así un mayor volumen de esperma.

Pues, entre otras cosas, en eso estamos durante nuestra estancia en Portugal. Hemos tratado de obtener esperma de pez cebra mediante masaje abdominal y congelarlo inmediatamente, usando diferentes crioprotectores como parte del medio de congelación.

miércoles, 18 de junio de 2014

Congelando testículo de corvinas

Hace unos días pude echar una mano a Marta F. Riesco y Elsa Cabrita en una de sus sesiones de trabajo en el Centro de Acuicultura del IPMA (Instituto Portugués del Mar y de la Atmósfera) en Olhao.
 

El objetivo era congelar fragmentos de testículo (como los de la foto) de corvina (Argyrosomus regius) de determinada edad, cuando tienen un mayor porcentaje de espermatogonias, para luego poder aislarlas disgregando el tejido testicular una vez descongelado.


En este caso utilizamos un biocongelador portátil que permite establecer rampas de congelación (como muestra la foto), bajando la temperatura de las muestras al ritmo que se programe. Y un vez congeladas se pasan a nitrógeno líquido para su almacenamiento. Eso sí, ocupa un montón de espacio. Ya veis cómo iba el coche!.

miércoles, 4 de junio de 2014

AQUAGAMETE - 2nd Core Group meeting

La tarde del pasado domingo 25, y aprovechando la asistencia de varios colegas para participar en el 10th ISRPF, tuvimos la segunda reunión del Core Group de la Acción COST AQUAGAMETE en las instalaciones del CCMAR en el Campus de Gambelas (Faro). Asistieron Ákos Horváth (Hungría), Elsa Cabrita (Portugal), Oliana Carnevali (Italia), Andrzej Ciereszko (Polonia) y yo mismo (España).

Durante la reunión se informó a los asistentes del estado de cuentas de la Acción, del presupuesto y del plan definitivo de las actividades previstas para el segundo periodo (junio 2014 – mayo 2015), de las conclusiones tras el último Annual Progress Conference de COST en Bulgaria, y se discutió de distintos aspectos relacionados con la marcha de AQUAGAMETE. Los responsables de los distintos Working Groups hicieron un informe de sus respectivas actividades y planes de trabajo, en especial en lo referente a las publicaciones previstas, la organización de las próximas Training Schools y de la quinta edición del International Workshop on the Biology of Fish Gametes en Ancona (Italia).

martes, 3 de junio de 2014

Buscando las células madre precursoras de espermatogonias


Marta F. Riesco y Elsa Cabrita han llevado a cabo estos días varias sesiones de trabajo en el Centro de Acuicultura (IPMAR). En ellas han ido recopilando muestras de testículo de corvinas de diferentes edades y, por lo tanto, en diferentes estadíos de desarrollo. 


Pretenden determinar en cuál de ellos es posible encontrar las células madre precursoras de espermatogonias. La evaluación histológica de las muestras permitirá obtener las primeras conclusiones.
Estos estudios completarán la caracterización y secuenciación del marcador molecular vasa, así como la expresión de dicho marcador a lo largo del desarrollo gonadal en esta especie. Estos estudios representan un avance en la problemática reproductiva relacionada con esta especie en la que todavía no ha sido descrito ningún marcador de la línea germinal. Servirán como herramienta de caracterización y de seguimiento de dichas espermatogonias (que junto con las PGCs son los únicos tipos celulares con capacidad de migración a la la cresta germinal si se microinyectan en una larva portadora) en potenciales xenotrasplantes para la producción subrogada de gametos de esta especie (cuyos reproductores son muy grandes, lo que supone varios problemas de mantenimiento en cautividad) en otras especies similares y con reproductores de menor tamaño.

lunes, 2 de junio de 2014

Un poco de histología


Mientras que yo les dedico ratos a los peces cebra, a Luz y Marta les ha tocado hace unos días algo de técnicas clásicas de histología: hacer bloques de parafina, cortarlos con microtomo y teñirlos.

En el caso de Luz se trata de unas muestras que trajimos fijadas desde Valencia, en concreto tras un muestreo de unas hembras de anguila en el Centro de Cultivo de Peces de Aguas Templadas de Polinyà del Xúquer (Generalitat Valenciana). Las observaciones histológicas complementarán los análisis de expresión génica de distintos ARNs ribosómicos que de esos mismos animales está haciendo el equipo de nuestro colega Ibón Cancio, de la Universidad del País Vasco. Los resultados se presentarán en la sesión especial de AQUAGAMETE en el AE2014 el próximo octubre.

En el caso de Marta, se trata de localizar las espermatogonias de la corvina. Os lo cuento mejor en otra entrada porque el tema lo merece.

miércoles, 28 de mayo de 2014

Nuevo muestreo de lenguados

La semana pasada volvimos a las instalaciones de acuicultura experimental de Ramalhete del CCMAR en la Ria Formosa, de cuyas instalaciones os pongo algunas imágenes.



Como la semana anterior habíamos determinado el sexo de los ejemplares de varios lotes de lenguados reproductores, en esta ocasión hemos localizado rápidamente a 5 de los machos mediante los chips que llevan instalados (y gracias al buen ojo de Elsa).


Una vez anestesiados, de cuatro de ellos pudimos obtener esperma masajeando el testículo y absorbiendo la muestra con una jeringa desde el poro genital (escondido por una de las aletas en el costado del pez), y procurando que no se contamine con la orina del animal.

Ya veis en la foto el escaso volumen que producen, así que procedimos a diluirlo con varios medios diluyentes que estamos ensayando como parte de los trabajos que estamos realizando aquí.

Tras desplazarnos rápidamente al Campus de Gambelas procedimos al análisis de las muestras recogidas utilizando el ISAS, un sistema CASA (computer-assisted sperm analysis) de la empresa valenciana Proiser.

Una primera medida de diferentes parámetros de movilidad de los espermatozoides mantenidos en los diferentes diluyentes tras ser diluidos en agua de mar, seguida de otra medida a las 24 h, nos permitirá ir concluyendo qué tipo de diluyentes funcionan mejor con el esperma de esta especie. En las próximas semanas iremos aumentando el número de observaciones para que nuestros resultados sean lo suficientemente sólidos.

martes, 27 de mayo de 2014

Asistimos al 10th ISRPF

Esta semana se está celebrando en el Auditorio Municipal de Olhão la décima edición del International Symposium on the Reproductive Physiology of Fish, congreso que se celebra cada cuatro años (aunque en este caso se celebra tan sólo tres después del último para evitar que en el futuro coincida con el congreso bienal Fish Endocrinology, al que suelen asistir muchos de los participantes en éste).
Hemos podido asistir Luz Pérez, David S. Peñaranda, Marina Morini, Mamen Vílchez y yo mismo. Nuestro grupo ha hecho un esfuerzo importante por participar con varios trabajos en un congreso de este nivel, y buena parte de ellos se han llevado a cabo en colaboración con equipos extranjeros. Así, como orales, presentaremos estos tres trabajos:

●Temperature as modulator of the steroidogenic process in European eel: migratory implications
D.S. Peñaranda, M. Morini, M.C. Vílchez, V. Gallego, I. Mazzeo, R.P. Dirks, G.E.E.J.M. van den Thillart, H. Tveiten, L. Pérez, J.F. Asturiano

●The ion puzzle which makes the eel sperm motile
L. Pérez, V. Gallego, M.C. Vílchez, M. Morini, R. Baeza, D.S. Peñaranda, J.F. Asturiano

●DNA methylation of fish germ cells and the risk of alteration after cryopreservation
C. Labbé, A. Depincé, P. Milon, M. Morini, M. Riesco, V. Robles, J.F. Asturiano, Á. Horváth, M.P. Herráez

Mientras que en las sesiones de posters mostraremos otros cuatro trabajos:

●Water temperature effect on fatty acid mobilization in male European eels during sexual maturation and relationship between fatty acids, steroids and sperm quality parameters
R. Baeza, I. Mazzeo, M.C. Vílchez, V. Gallego, D.S. Peñaranda, L. Pérez, J.F. Asturiano

●Progestin receptors expression in European eel testis through spermatogenesis
M. Morini, D.S. Peñaranda, M.C. Vílchez, V. Gallego, R. Nourizadeh-Lillabadi, J.F. Asturiano, F.-A. Weltzien, L. Pérez

●Sperm protein for egg activation: PLCZ1 expression in European eel testis through spermatogenesis
M. Morini, D.S. Peñaranda, M.C. Vílchez, V. Gallego, R. Nourizadeh-Lillabadi, J.F. Asturiano, F.-A. Weltzien, L. Pérez

●Effect of thermal regime on vitellogenesis, ovulation and larval development of European eel
M.C. Vílchez, L. Pérez, I. Mazzeo, D.S. Peñaranda, V. Gallego, S. Dufour, F.-A. Weltzien, J.F. Asturiano


Disponible el programa de las V Jornadas de Ictiología

Ya está disponible el programa de la próximas jornadas!

Puedes descargarlo en 
http://sibic.org/jornadas/2014/



lunes, 19 de mayo de 2014

Trabajos con pez cebra

Ya desde la primera semana de esta estancia he podido empezar a trabajar con los técnicos del Grupo de EDGE (Gil, Francisco y el gallego Paulo) encargados de los trabajos con pez cebra (Danio rerio), que pacientemente responden a mis preguntas a la vez que me ayudan con mi portugués.

El Grupo dispone de dos instalaciones dedicadas a esta especie y en las que mantienen líneas de ejemplares con distintas mutaciones interesantes para sus numerosos estudios, especialmente sobre fisiología de tejido óseo.

Uno de mis objetivos de esta estancia es aprender el manejo básico de esta especie y este tipo de instalaciones en un centro de referencia como este. Por el momento he ayudado con las labores de limpieza, las de alimentación (con pienso, Artemia y Artemia enriquecida), con la rutina de los cruces diarios entre reproductores y con el cuidado larvario. Muy interesante y muy laborioso.

jueves, 15 de mayo de 2014

De corvinas y meros


Hace unos días acudimos al Centro de Acuicultura (IPMAR) en la vecina localidad de Olhão, donde pudimos muestrear una corvinas (Argyrosomus regius) para obtener unas muestras de testículo para los trabajos de expresión génica que está realizando Marta.

Pudimos visitar las instalaciones (tanto tanques en el interior como en balsas exteriores), cuyo funcionamiento cofinancian muchos proyectos, y acompañados por Florbela Soares, una de las investigadoras, conocer a su responsable y saber de algunos de los trabajos que llevan o han llevado a cabo con especies como la corvina, la dorada o el mero.


Entre otras actividades, el centro realiza labores de difusión de la acuicultura y cuentan con varios acuarios dispuestos para las visitas de público. Nos sorprendió mucho la curiosidad de este ejemplar de mero que se empeñó en posar para nosotros.



martes, 13 de mayo de 2014

Muestreo de lenguados



El martes por la mañana estuvimos con Elsa y Marta en las instalaciones de acuicultura experimental de Ramalhete que el CCMAR tiene desde 2001 en la Ria Formosa, en las salinas junto al aeropuerto de Faro.

Allí estuvimos determinando el sexo de los ejemplares de unos lotes de lenguados (Solea senegalensis) y comprobando qué machos están produciendo esperma para utilizarlos en nuestros próximos trabajos.


En esta especie el volumen de esperma producido por los machos es muy escaso (unos microlitros), pero el análisis de las muestras recogidas confirmó la presencia de espermatozoides en buena parte de los ejemplares que clasificamos inicialmente como machos.

Primera semana de estancia en la Universidad del Algarve



Luz Pérez y yo nos hemos venido a Faro (Portugal) a realizar una estancia. Esta primera semana hemos empezado a trabajar en la Faculty of Sciences and Technology (FCT) y el Centre of Marine Sciences (CCMAR) de la Universidad del Algarve (UAlg), con la Dra. Elsa Cabrita (Grupo de Acuicultura, Aquagroup) y el Dr. Paulo Gavaia (Grupo de Biología Molecular de Organismos Marinhos_EDGE). 


Coincidimos aquí con la Dra. Marta Fernández Riesco que tras acabar su Tesis en la Universidad de León recientemente, está haciendo una pequeña estancia postdoctoral financiada por AQUAGAMETE, y con la que coordinaremos parte de los trabajos.

Durante la semana he tenido que dedicar algo de tiempo a la burocracia pendiente, mientras que Luz y Marta han empezado a procesar muestras para su evaluación histológica. También nos instalamos en nuestros acogedores y tranquilos despachos, en unos edificios de madera en el pinar frente al edificio principal. Gracias!.

El jueves tuvimos ocasión de asistir junto con todos los componentes del Grupo de Acuicultura a una charla de la Prof. Emérita María Teresa Dinis sobre las características de distintas instalaciones dedicadas a la producción acuícola en la provincia de Sao Paulo (Brasil), tras una visita que recientemente ha realizado a la zona.

2nd AQUAGAMETE Training School

La Acción COST AQUAGAMETE (aquagamete.webs.upv.es/web) ha organizado una Training School titulada “Molecular basis of fish gamete quality” para un máximo de 16 estudiantes y jóvenes investigadores y representantes de la industria.

El curso, organizado por los doctores  Catherine Labbé, Christian Fauvel y Julien Bobe, se centrará en la integración de diferentes aspectos sobre:
- Análisis transcriptómico de la calidad de los gametos, incluyendo prácticas con análisis de microarrays.
- Evaluación de la calidad de los gametos incluyendo prácticas con citometría de flujo y efectos sobre embriones.
- Conferencias sobre genómica y toxicogenómica, epigenética, y un repaso de aspectos relacionados con la calidad de los gametos de peces y moluscos.

El curso tendrá lugar entre el 23 y el 27 de junio de 2014 en las instalaciones del INRA Fish Physiology and Genomics laboratory (Rennes, France, http://www6.rennes.inra.fr/lpgp_eng/ ) y contará con la colaboración del IFREMER y la University of Lorraine.

viernes, 9 de mayo de 2014

Annual Progress Conference de COST

Como Chair de la Acción COST AQUAGAMETE (aquagamete.webs.upv.es), he asistido del 28 al 30 de abril a la Annual Progress Conference organizada por la COST Office como uno de los métodos de seguimiento de la marcha de las acciones subvencionadas, en este caso de las del Domain Food and Agriculture.
La reunión ha tenido lugar en Plovdiv (Bulgaria), y ha consistido en diferentes sesiones en las que los Chair hemos ido exponiendo los resultados de cada Acción en el último periodo frente a los miembros del Food and Agriculture Domain Committee de COST y de los Chair del resto de acciones. Asimismo, al acabar cada presentación se ha escuchado también el informe de cada Rapporteur (hay uno por Acción) que supervisa y hace el seguimiento de cada una de ellas.
En el caso de AQUAGAMETE ha destacado el alto número de estancias (Short Term Scientific Missions), 31, financiadas en el primer grant period, así como el incremento de países (de 18 a 26) y el número de investigadores participantes (actualmente somos 355).
Como puntos débiles, se ha mencionado la poca información accesible en nuestra web sobre los resultados obtenidos, especialmente durante las STSM y la necesidad de profundizar en los objetivos de la Acción, especialmente los de intercalibración y estandarización.

He tenido la posibilidad de cambiar impresiones con investigadores que lideran otras Acciones COST y se han planteado futuras colaboraciones, así como la posibilidad de llevar a cabo acciones inter-Acción en los próximos grant periods.

miércoles, 7 de mayo de 2014

Llegamos a las 25.000 visitas

Poco me podía imaginar cuando empecé a escribir este blog que algún día llegaría a registrar un total de 25.000 visitas. No ha sido nunca el principal objetivo, pero pensar que lo que he ido mostrando aquí ha podido interesar o al menos llamar la atención de tanta gente, resulta estimulante. Gracias por estar al otro lado!



jueves, 24 de abril de 2014

Nos visita Eszter Kása

Durante cuatro semanas hemos tenido con nosotros a Eszter Kása, que realiza su Tesis Doctoral en la Szent István University (Gödöllő, Hungría) bajo la supervisión de nuestro colega Ákos Horváth. Eszter ha contado con una Short Term Scientific Mission financiada por AQUAGAMETE. Hemos trabajado en distintas técnicas de preservación de esperma de anguila europea, aunque los machos no han colaborado mucho esta vez. Así que Eszter, tendrás que volver!
Los primeros resultados se presentarán en las V Jornadas Ibéricas de Ictiología en Lisboa en junio, y en la sesión especial de AQUAGAMETE en el EAS2014 en San Sebastián en octubre.

domingo, 6 de abril de 2014

Nuestro último artículo, aceptado en Theriogenology



Sperm motility parameters and spermatozoa morphometric characterization in marine species: a study of swimmer and sessile species

V. Gallego, L. Pérez, J.F. Asturiano and M. Yoshida

Abstract
The biodiversity of marine ecosystems is diverse and a high number of species coexist side by side. However, despite the fact that most of these species share a common fertilization strategy, a high variability in terms of the size, shape and motion of spermatozoa can be found. In this study, we have analysed both the sperm motion parameters and the spermatozoa morphometric features of two swimmer (pufferfish and European eel) and two sessile (sea urchin and ascidian) marine species.
The most important difference in the sperm motion parameters was registered in the swimming-time period. The sperm of the sessile species displayed notably higher values than those of the swimmer species. In addition, the sperm motilities and velocities of the swimmer species decreased sharply from the moment the sperm was activated, whereas the sessile species were able to maintain their initial values for a long time. These results are linked directly to the species-specific lifestyles. While sessile organisms, who demonstrate limited or no movement, need to have sperm with a capacity to swim for long distances in order to find the oocytes, swimmer organisms can move towards the female and release gametes near it, and therefore the spermatozoa does not need to  be able to swim for such a long time period.
On the other hand, sperm morphology is related to sperm motion parameters and in this study an in depth morphometric analysis by CASA software of ascidian, sea urchin and pufferfish spermatozoa has been carried out for the first time. A huge variability in shapes, sizes, and structures were found using electron microscopy in the studied species.

International Conference on "Sex determination and differentiation in fishes - Genes, environment and behaviour

It will take place September 23th–24th, 2014 at Fundação da Faculdade de Ciências (FFCUL), Lisboa.

This conference aims to promote knowledge exchange and debate on the latest findings regarding processes of sex differentiation and mechanisms of primary sex determination in fishes. Genetic/epigenetic, environmental and behavioural factors will be discussed as well as the diversity of evolutionary scenarios described in fishes.
This international meeting will feature three outstanding speakers in the field: MANFRED SCHARTL (University of Würzburg, Germany), FRANCESC PIFERRER (Institut de Ciencies del Mar, CSIC, Spain) and RUI OLIVEIRA (ISPA, Portugal).

More info: https://www.fc.ul.pt/en/conferencia/sex-determination-and-differentiat
ion-fishes

sábado, 29 de marzo de 2014

Nuestro último artículo, aceptado en Aquaculture


Effect of thermal regime on fatty acid dynamics in male European eels (Anguilla anguilla) during hormonally-induced spermatogenesis
R. Baeza, I. Mazzeo, M.C. Vílchez, V. Gallego, D.S. Peñaranda, L. Pérez, J.F. Asturiano

Abstract
Little is known about the role of fat and fatty acids in European eel spermatogenesis. The aim of this work was to study the changes in fat content and to carry out a quantitative analysis of the fatty acid composition of the muscle, liver and gonad of European male eels throughout hormonally induced sexual maturation. The experiment was carried out under three different thermal regimes (two of them variable: T10 and T15; and one constant: T20) to replicate the changes of temperature that these fish undergo during their transoceanic reproductive migration. The European eel reached spermatogenesis earlier in treatment T20, suggesting that spermatogenesis in this species is closely regulated by water temperature. Although eels lose body mass due to the period of fasting that accompanies gonadal growth, no significant changes were found in the fat and fatty acid content of the muscle during the experimental period.
With regards to the liver, the levels of palmitic, eicosapentaenoic (EPA) and docosahexaenoic (DHA) acids increased significantly at the start of the spermiation process in all the thermal treatments.

In the testis, EPA, arachidonic acid (ARA) and DHA remained constant during the maturation process while the levels of the rest of the fatty acids decreased significantly. The stability of ARA and EPA levels in the testis may have a physiological significance, whereas the stability of DHA levels may have a structural one. The results suggest that the advancement of spermiation is influenced by water temperature and demonstrate the importance of the roles of EPA, ARA and DHA in European eel reproduction. This study makes it clear that complementary studies focusing on lipid composition of commercial diets could improve sperm quality in this species.

jueves, 27 de marzo de 2014

La Acción COST AQUAGAMETE financiará 14 nuevas estancias


La Acción COST AQUAGAMETE financiará 14 nuevas estancias (Short Term Scientific Missions) durante los últimos tres meses de su primer periodo (Marzo 2013-Mayo 2014), llegando así a un total de 31 estancias financiadas.

Los investigadores implicados viajarán de Dinamarca a Francia (1); República Checa a Japón (1); Francia a España (1); Hungría a España (1); República Checa a Francia (3); República Checa a España (1); España a Portugal (1); España a Eslovenia (1); España a Francia (1); Israel a Francia (1); Portugal a Italia (1); y Serbia a Hungría (1).


Buen viaje y mucho éxito a todos!