Congelando esperma de pez cebra, I: ¿por qué?

Además de las ventajas de trabajar con una especie del tamaño y forma de vida propia de los peces cebra (Danio rerio), las miles de líneas mutantes y transgénicas del pez cebra son una herramienta fundamental en muchas áreas de investigación (fisiología, biomedicina, toxicología, biología del desarrollo, etc.) que utilizan estos peces especiales como modelo para experimentación animal.

Sin embargo, algunas de estas líneas tienen problemas reproductivos que limitan el número de ejemplares disponibles. Y, por otro lado, convendría poder conservar el material genético propio de estos ejemplares en previsión de patologías o accidentes que pudiesen suponer la muerte de todo el lote de peces.

Así pues, en los últimos años se han ido haciendo intentos para congelar el esperma de esta especie, pero dado el escaso volumen de esperma que puede obtenerse de cada macho, a menudo se han basado en el sacrificio de los ejemplares para extraer sus testículos y obtener así un mayor volumen de esperma.

Pues, entre otras cosas, en eso estamos durante nuestra estancia en Portugal. Hemos tratado de obtener esperma de pez cebra mediante masaje abdominal y congelarlo inmediatamente, usando diferentes crioprotectores como parte del medio de congelación.

Congelando testículo de corvinas

Hace unos días pude echar una mano a Marta F. Riesco y Elsa Cabrita en una de sus sesiones de trabajo en el Centro de Acuicultura del IPMA (Instituto Portugués del Mar y de la Atmósfera) en Olhao.

 

El objetivo era congelar fragmentos de testículo (como los de la foto) de corvina (Argyrosomus regius) de determinada edad, cuando tienen un mayor porcentaje de espermatogonias, para luego poder aislarlas disgregando el tejido testicular una vez descongelado.

En este caso utilizamos un biocongelador portátil que permite establecer rampas de congelación (como muestra la foto), bajando la temperatura de las muestras al ritmo que se programe. Y un vez congeladas se pasan a nitrógeno líquido para su almacenamiento. Eso sí, ocupa un montón de espacio. Ya veis cómo iba el coche!.

AQUAGAMETE - 2nd Core Group meeting

La tarde del pasado domingo 25, y aprovechando la asistencia de varios colegas para participar en el 10^th ISRPF, tuvimos la segunda reunión del Core Group de la Acción COST AQUAGAMETE en las instalaciones del CCMAR en el Campus de Gambelas (Faro). Asistieron Ákos Horváth (Hungría), Elsa Cabrita (Portugal), Oliana Carnevali (Italia), Andrzej Ciereszko (Polonia) y yo mismo (España).

Durante la reunión se informó a los asistentes del estado de cuentas de la Acción, del presupuesto y del plan definitivo de las actividades previstas para el segundo periodo (junio 2014 – mayo 2015), de las conclusiones tras el último Annual Progress Conference de COST en Bulgaria, y se discutió de distintos aspectos relacionados con la marcha de AQUAGAMETE. Los responsables de los distintos Working Groups hicieron un informe de sus respectivas actividades y planes de trabajo, en especial en lo referente a las publicaciones previstas, la organización de las próximas Training Schools y de la quinta edición del International Workshop on the Biology of Fish Gametes en Ancona (Italia).

Buscando las células madre precursoras de espermatogonias

Marta F. Riesco y Elsa Cabrita han llevado a cabo estos días varias sesiones de trabajo en el Centro de Acuicultura (IPMAR). En ellas han ido recopilando muestras de testículo de corvinas de diferentes edades y, por lo tanto, en diferentes estadíos de desarrollo. 

Pretenden determinar en cuál de ellos es posible encontrar las células madre precursoras de espermatogonias. La evaluación histológica de las muestras permitirá obtener las primeras conclusiones.

Estos estudios completarán la caracterización y secuenciación del marcador molecular vasa, así como la expresión de dicho marcador a lo largo del desarrollo gonadal en esta especie. Estos estudios representan un avance en la problemática reproductiva relacionada con esta especie en la que todavía no ha sido descrito ningún marcador de la línea germinal. Servirán como herramienta de caracterización y de seguimiento de dichas espermatogonias (que junto con las PGCs son los únicos tipos celulares con capacidad de migración a la la cresta germinal si se microinyectan en una larva portadora) en potenciales xenotrasplantes para la producción subrogada de gametos de esta especie (cuyos reproductores son muy grandes, lo que supone varios problemas de mantenimiento en cautividad) en otras especies similares y con reproductores de menor tamaño.

Un poco de histología

Mientras que yo les dedico ratos a los peces cebra, a Luz y Marta les ha tocado hace unos días algo de técnicas clásicas de histología: hacer bloques de parafina, cortarlos con microtomo y teñirlos.

En el caso de Luz se trata de unas muestras que trajimos fijadas desde Valencia, en concreto tras un muestreo de unas hembras de anguila en el Centro de Cultivo de Peces de Aguas Templadas de Polinyà del Xúquer (Generalitat Valenciana). Las observaciones histológicas complementarán los análisis de expresión génica de distintos ARNs ribosómicos que de esos mismos animales está haciendo el equipo de nuestro colega Ibón Cancio, de la Universidad del País Vasco. Los resultados se presentarán en la sesión especial de AQUAGAMETE en el AE2014 el próximo octubre.

En el caso de Marta, se trata de localizar las espermatogonias de la corvina. Os lo cuento mejor en otra entrada porque el tema lo merece.